Ali Düşenkalkar, 1961 yılında Kıbrıs'ın Lefkoşa şehrinde doğdu. Kendisi de bir oyuncu olan Munis Düşenkalkar'ın kardeşidir. İlkokul, ortaokul ve lise eğitimini Lefkoşa'da tamamladı. Lise yıllarında, savaş karşıtı gösterilerde bulunan bir sokak tiyatrosunda yer aldı. 1979 yılında İstanbul'a giderek Devlet Konservatuvarı'nda tiyatro eğitimi almaya başladı ve 1983 yılında Mimar Sinan Üniversitesi Devlet Konservatuvarı'ndan mezun oldu. Mezuniyetinin ardından İstanbul Devlet Tiyatrosu'nda görevine başladı.
Ali Düşenkalkar, tiyatro oyunlarının yanı sıra radyo tiyatrosu, radyo programları, belgeseller, sinema filmleri ve dizi seslendirmeleri gibi birçok alanda çalışmalar yapmaktadır. Uzun yıllardır Atatürk'ün Nutuk'u sunumuyla sivil toplum kuruluşlarına, askeri okullara, üniversitelere ve yurt dışındaki Türk topluluklarına hizmet vermektedir.
Halihazırda İstanbul Devlet Tiyatrosu'nda görevine devam eden Ali Düşenkalkar, "Dialog Anlatım ve İletişim" adlı kurumda Diksiyon, Fonetik, Drama ve Konuşma dersleri vermektedir. Aynı zamanda Eskişehir Anadolu Üniversitesi Konservatuvarı Tiyatro Bölümü'nde öğretim görevlisi olarak görev yapmaktadır.
Evli ve bir çocuk babası olan Ali Düşenkalkar, 2011 yılında Şerif Gören'in yönetmenliğini üstlendiği "Ay Büyürken Uyuyamam" adlı sinema filminde Ayça Bingöl, Hazal Kaya, Selin Şekerci ve Fırat Çelik gibi isimlerle birlikte rol aldı. Ayrıca, Faruk Teber'in yönettiği "Hanımın Çiftliği" adlı dizide Mehmet Aslantuğ, Özgü Namal ve Caner Cindoruk gibi önemli isimlerle birlikte "Kabak Hafız" karakterini canlandırdı. Son olarak da Trt 1'de yayınlanan Gönül Dağı dizisinde Düğüncü Muammer rolünü üstlenmişti.
